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酶標儀是測什么的
發(fā)布時(shí)間: 2021-01-27 點(diǎn)擊次數: 2878次即酶聯(lián)免疫檢測儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器又稱(chēng)微孔板檢測器??珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類(lèi),但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計,即用比色法來(lái)進(jìn)行分析。 測定一般要求測試液的終體積在250μL以下,用一般光電比色計無(wú)法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
酶標儀實(shí)際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同. 圖示是一種單通道自動(dòng)進(jìn)樣的酶標儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過(guò)標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號.電信號經(jīng)前置放大,對數放大,模數轉換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數據處理和計算,后由顯示器和打印機顯示結果. 微處理機還通過(guò)控制電路控制機械驅動(dòng)機構X方向和Y方向的運動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現自動(dòng)進(jìn)樣檢測過(guò)程.而另一些酶標儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測,因此省去了X,Y方向的機械驅動(dòng)機構和控制電路,從而使儀器更小巧,結構也更簡(jiǎn)單.
微孔板是一種經(jīng)事先包埋于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內都包埋著(zhù)相應的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.
光是電磁波,波長(cháng)100nm~400nm稱(chēng)為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀(guān)察到,大于780nm稱(chēng)為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光,但對綠色不吸收,反射出來(lái),所以植物呈現為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長(cháng)下,檢測被測物的吸光值。
隨著(zhù)檢測方式的發(fā)展,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)發(fā)光(Lum)。
酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長(cháng)范圍內的任意波長(cháng),而濾光片型酶標儀則根據選配的濾光片,只能截取特定波長(cháng)進(jìn)行檢測。
檢測單位
光通過(guò)被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長(cháng)下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫(xiě),表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關(guān)系:
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來(lái)的光強度。
OD值由下述公式計算:
c為檢測物的濃度 b為檢測物的厚度 a為摩爾因子
在特定波長(cháng)下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(cháng),在此波長(cháng)下,此物質(zhì)能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長(cháng)段,就會(huì )造成檢測結果的不準確。因此,在測定檢測物時(shí),我們選擇特定的波長(cháng)進(jìn)行檢測,稱(chēng)為測量波長(cháng)。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個(gè)參照波長(cháng),以消除這個(gè)不準確性。在參照波長(cháng)下,檢測物光的吸收小。檢測波長(cháng)和參照波長(cháng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
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